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改良Lowry法蛋白定量試劑盒文章資料

更新時間:2023-08-01    點擊次數(shù):1912

改良Lowry法蛋白定量試劑盒


產(chǎn)品簡介:

目上常用的蛋白濃度檢測方法是:BCA蛋白定量試劑盒(BCAProteinAssayKit)和Bradford蛋白定量試劑盒(BradfordProteinAssayKit)。改良Lowry法蛋白定量試劑盒是利用蛋白中肽鍵與銅離子結(jié)合成四配位基銅離子復(fù)合物,后者與Folin試劑(福林酚)反應(yīng),產(chǎn)生藍色比色物,用分光光度法(酶標儀或分光光度計)檢測750nm處吸光度,并與標準曲線比較,求得待測蛋白樣品的濃度,在1~1500μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

組成:

產(chǎn)品名稱

PD003-500T

PD003-1000T

Storage

試劑(A):Folin-CiocalteuReagent

5ml

10ml

RT避光

試劑(B):改良LowryReagent

B1:LowryA

100ml

2×100ml

RT

B2:LowryB

2ml

4ml

RT

B3:LowryC

2ml

4ml

RT

臨用,按LowryA:B:C=50:1:1比例配制改良LowryReagent,即配即用。

試劑(C):蛋白標準(BSA,10mg/ml)

1ml×2

4ml

-20°C

試劑(D):蛋白標準稀釋液

2ml

4ml

RT

說明書

一份







根據(jù)樣品數(shù)量按照試劑(A):Folin-CiocalteuReagent:ddH2O=1:1的比例配制工作液現(xiàn)配現(xiàn)用

儲存條件:

12個月有效。


改良Lowry法蛋白定量試劑盒 操作步驟(僅供參考):

1、取適量10mg/ml蛋白標準,稀釋至終濃度為1500μg/ml或所需濃度。如取150μl 10mg/ml蛋白標準,加入850μl稀釋液,充分混勻,即配制1500μg/ml蛋白標準。

2、根據(jù)樣品數(shù)量,按試劑(B1):試劑(B2):試劑(B3)=50:1:1的比例配制改良LowryReagent工作液,充分混勻。

3、將1500μg/ml蛋白標準用稀釋待測樣品的溶液5倍梯度稀釋,濃度分別為300μg/ml、60μg/ml、12.5μg/ml、2.5μg/ml、0μg/ml,各取40μl加到96孔板的標準品孔。

4、加待測蛋白樣品或稀釋液(空白對照)到96孔板的樣品孔中,如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液不同,應(yīng)在待測蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液;如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同,無需在待測蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液。

5、用多通道微量移液器快速將200μl配置好的改良LowryReagent工作液加入至各孔,立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動輕輕混勻。室溫準確孵育。

6、用多通道微量移液器快速將20μl新鮮配置的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中,立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動輕輕混勻30s。

7、輕輕混勻96孔板,酶標儀或微量滴定板讀數(shù)儀測定750nm處吸光度,也可用分光光度計測定,但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測體積,檢測樣品數(shù)量亦相應(yīng)減少。


注意事項:

1、蛋白標準原液中含有防腐劑,不影響后續(xù)檢測,該蛋白標準原液-20℃保存。

2、待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致,有可能導(dǎo)致測定不準確。

3、如果沒有酶標儀,也可以使用普通的分光光度計測定,但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測體積。

4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5、本產(chǎn)品僅供科研使用,嚴禁它用。

     標簽:
蛋白定量試劑盒 試劑盒 本生試劑盒 試劑A

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