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rna試劑盒的操作步驟

更新時間:2022-05-26    點擊次數(shù):955
   rna試劑盒用于各種植物、動物、微生物的RNA提取,在每個試劑盒里都有一份說明使用說明書。實驗者只需要按照說明書上的步驟操作即可。使用時無需配制其它試劑,非常方便,適合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、純度高,可用于分子生物學后實驗。但較好的試劑盒價格比較貴,在實驗室可以根據(jù)自己的實驗需要來定奪試劑盒的使用。
  rna試劑盒的操作步驟:
  1. 樣品處理
  a. 植物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混勻。
  b. 動物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液,用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。
  c. 貼壁細胞:直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細胞,每106細胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。
  d. 細胞懸液:離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。
  e. 血液處理:取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液,混勻后室溫放置10分鐘, 10000rpm離心1分鐘。棄上清,若沉淀含有紅細胞,可加入2倍體積紅細胞裂解液重復裂解步驟。離心后沉淀加入1 ml裂解液混勻。
  2. 將處理后的樣品在室溫放置5分鐘,使得核酸蛋白復合物*分離。
  3. 向勻漿樣品中加0.2ml氯仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩15秒,室溫放置3-5分鐘。
  4. 2-8℃ 12000rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中,把水相轉(zhuǎn)移到新管中,不要吸到沉淀。
  5. 吸附柱前處理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室溫放置2分鐘,2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min,棄廢液。
  6. 第4步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻,加入吸附柱靜置2分鐘,2-8 12000rpm ℃ 離心2min,棄廢液。
  7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min,棄廢液。
  8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min,棄廢液。
  9. 12000rpm離心2min,棄掉收集管,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
  10. 將吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室溫放置5min,12000rpm室溫離心2min即得到RNA。
 

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